產(chǎn)品分類
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簡要描述:Calcein-AM/PI活死細胞染色試劑 細胞培養(yǎng)本產(chǎn)品含有Calcein-AM和PI兩種組分。Calcein-AM是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,其熒光呈綠色(Ex=490nm, Em=515nm)。
品牌 | YOBIBIO/攸碧艾 | 貨號 | U23-002A |
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規(guī)格 | 500T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 細胞培養(yǎng),檢測細胞活性,細胞染色 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
本產(chǎn)品含有Calcein-AM和PI兩種組分。Calcein-AM是一種對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑,其熒光呈綠色(Ex=490nm, Em=515nm)。因其在傳統(tǒng)的Calcein(鈣黃綠素)基礎上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團,增加了疏水性,使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后,Calcein-AM(本身不發(fā)熒光)被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein,從而被滯留在細胞內(nèi)并發(fā)出強綠色熒光。由于死細胞缺乏酯酶,Calcein-AM僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標記。因此,Calcein-AM常常與死細胞熒光探針如碘化丙啶(PI)等聯(lián)合使用,同時進行活細胞和死細胞的熒光雙重染色。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)不能穿過活細胞的細胞膜,僅能穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核,并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(Ex=535 nm, Em=615 nm),因此PI僅對死細胞染色。
本產(chǎn)品中Calcein-AM濃度為:1 mM,建議工作濃度1~10 μM;PI濃度為:1 mM,建議工作濃度1~10 μM;
使用方法(僅供參考):
1.Calcein-AM/PI工作液配制:(推薦Calcein-AM: 2 μM, PI: 4 μM) 分別取10 μl的Calcein-AM和20 μl的PI儲存溶液,加入至5 ml的PBS中,充分混勻,備用; 【注意】:由于Calcein-AM的穩(wěn)定性比較差,此染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,并且在當天用完。 Calcein-AM和PI的最佳濃度是因不同的細胞種類而定,初次實驗建議做梯度實驗,以確定Calcein-AM和PI的最適濃度。
2.染色前先用PBS洗滌細胞兩次;
3.加入適量的Calcein-AM/PI工作液(貼壁細胞覆蓋即可),在培養(yǎng)箱中孵育15-30 min;
4.用PBS或適當?shù)木彌_液洗滌細胞兩次;
5.熒光顯微鏡下觀察細胞染色結(jié)果, Calcein-AM檢測波長:Ex=490nm(藍光激發(fā)), Em=515nm;PI檢測波長:Ex=535 nm(綠光激發(fā)), Em=615 nm; 儲存條件 -20oC保存, 一年有效;
僅供科學研究使用 注意事項:
1.使用前先將低溫保存的試劑在室溫條件下放置20-30 min。
2.由于Calcein-AM對濕度非常敏感,工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
3.第一次使用可對儲存液進行分裝,以減少反復凍融次數(shù)。
4.血清的存在可能會干擾Calcein-AM染色,染色前請先用PBS洗滌細胞。
5.碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作時一定要注意防護。若接觸到皮膚,需要立即用自來水清洗。
6.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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